Способ выделения и органного культивирования мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток глаза

There was stadied a possibility of co-transplantation of allogenic limbal mesenchymal progenitor/stem cells which passed the stage of organic cultivation, with a donor cornea during keratoplasty of a high risk for induction of immune tolerance.


В настоящее время в мировой трансплантологии в связи с ростом числа повторных пересадок и малой эффективностью медикаментозных средств посттрансплантационной иммуносупрессии пристальное внимание уделяется изучению супрессивных эффектов мультипотентных мезенхимальных стомальных клеток (ММСК), способных формировать иммунную толерантность при их сотрансплантации с донорским органом. Из литературных источников известно, что в лимбальной зоне глаза локализуются клетки, обладающие фенотипом мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток.

Цель.

Разработать технологию выделения и культивирования аллогенных лимбальных ММСК глаза человека для сотрансплантации с донорской роговицей при кератопластике высокого риска.

Материалы и методы.

Из глаз трупов-доноров роговиц с помощью микрохирургической техники перилимбально выделялись зоны палисад Фогта. Выделенные лоскуты подвергались обработке трипсином и коллагеназой в течение 16 ч при +4°С, затем в течение 15 мин - диспазой при +37°С. Для культивирования использовался стандартный состав питательных сред DMEM/F-12, содержащий ряд ростовых факторов.

Результаты и обсуждение.

В процессе органного культивирования лимбальных лоскутов в течение 6 недель получен значительный прирост мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в межфибриллярных пространствах с сохранением их «стволовости», определенный гистологическими и иммуногистохимическими методами. Определены показания к сотрансплантации с донорской роговицей человека при кератопластике высокого риска. Доказана возможность проведения экспериментально-клинических исследований предложенной технологии.

¹Тонаева Х.Д., ¹Борзенок С.А., ²Онищенко Н.А., ²Крашенинников М.Е., ¹Комах Ю.А., ¹Мороз З.И., ¹Ковшун Е.В., ¹Волкова О.С., ¹Ролик О.И., ¹Шипунова А.В.
¹ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. академика С.Н.Федорова» Росмедтехнологии, ²ФГУ «ФНЦ трансплантологии и ИО им. академика В.И. Шумакова», Москва