In experiments on 100 white laboratory rats does the complex estimation of safety have been carried out the relation of calcium deposits in the vital organs with using of morphological and histochemical methods. The results of our research illustrated ectopic application of allogenic GAP, doesn't provoke pathologic modifications and calcium deposits (Van-Koss method) in lung, heart, kidneys and lien tissues.
Одним из распространенных заболеваний опорно-двигательной системы является остеопороз. В борьбе с потерей костной массы в медицинской практике используют широкий спектр терапевтических препаратов для регуляции обмена фосфора и кальция в организме. Однако вследствие большой распространенности заболеваний ЖКТ применение данных препаратов «per os» нередко оказывается малоэффективным.
В ИЭМБ СамГМУ разработан новый способ получения и введения в организм аллогенного ГАП путем создания эктопического депо в мышечной ткани (Патенты РФ № 2168998, 2219933). Аллогенный ГАП получают из костной ткани и, кроме кальция и фосфора, он содержит органический компонент, а также микроэлементы в том же составе и количестве, в котором они содержатся в кости.
Целью исследования являлось проведение комплексной оценки безопасности в отношении отложения кальциевых депозитов в жизненно важных органах при введении аллогенного ГАП в мышцу у крыс.
Материалы и методы. Эксперимент выполнен на 100 самках белых лабораторных крыс массой 180-250 грамм. Все животные содержались в аналогичных условиях вивария на сбалансированном по белкам, жирам, углеводам и микроэлементам рационе питания. Они были разделены на 4 экспериментальные группы: 1-контроль (интактные животные), 2 - резорбция (овариоэктомия), 3 - опыт (введение ГАП на фоне резорбции), 4 - группа сравнения (введение ГАП здоровым животным). У крыс 2 и 3 групп создавалась гипоэстрогенная модель остеорезорбции путем двусторонней овариоэктомии. Для оценки эффективности модели остеопороза после овариоэктомии у животных проводили анализ влагалищных мазков ежедневно в течение 7 суток. В эксперименте участвовали только крысы, у которых не было обнаружено циклических изменений во время этого периода. Оценку метаболизма костной ткани определяли по содержанию свободного и белковосвязанного оксипролина, кальция и неорганического фосфата, активности щелочной фосфотазы в сыворотке крови крыс.
Для морфологических исследований после вывода животных из эксперимента методом декапитации проводился забор внутренних органов. По стандартной схеме изготавливались гистологические препараты, которые в дальнейшем окрашивали гематоксилином-эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону. Для обнаружения кальциевых депозитов применялся модифицированный в ИЭМБ метод Ван-Косса, основанный на реакции замещения. Использовали реактивы фирмы «Bio Optica» (Италия). Для отработки методики исследовали ткани почки и легкого человека с заболеваниями мочекаменной болезнью и туберкулезом легкого, где были обнаружены массивные отложения кальциевых депозитов. Гистологический материал исследовался с помощью светового микроскопа фирмы Olympus СХ 21.
Результаты. В гистологических препаратах внутренних органов при морфологическом исследовании не было выявлено патологических процессов как в контрольной, так и в опытных группах, так же не было выявлено отложений депозитов кальция, что позволяет сделать вывод о том, что применение аллогенного ГАП не имеет негативного влияния в отношении структуры внутренних органов.
Таким образом, гистологическое исследование внутренних органов показало, что эктопическое введение аллогенного ГАП безопасно в плане образования кальцификатов в жизненно важных органах.
Волова Л.T., Нефедова И.Ф., Писарева Е.В., Власов М.Ю.
ГОУ ВПО «Самарский Государственный Медицинский Университет Росздрава», г. Самара