Некоторые характеристики культур фибробластов, полученных из различных источников

The functional peculiarity of the different genesis fibroblasts in cultures was represented in this article, as the results of the research in vitro. Investigation was come out with cultures of the fibroblasts those obtained from different following sources: 6 samples — from unaltered skin that obtained by «Circumcizio» operation, 6 ones - from forearm skin of healthy volunteers, 6 ones - from unaltered skin of the patients with acute thermal trauma, 5 others - from cicatricial altered skin and 5 - from skin of psoriastic areas.

The results of the research showed that these cells differ each other functionally. In particular, some differences in fibronectine and IL-6 synthesis by cultured fibroblasts from unaltered skin, cicatricial altered one and skin from psoriastic affected parts were revealed.


Целью настоящего исследования было изучение особенностей функционирования фибробластов различного генеза в культуре in vitro.

Материалом для исследования стали 12 культур фибробластов, полученных из биоптатов здоровой кожи (6 - на операции «Circumcizio», 6 - из неизмененной кожи предплечья здоровых добровольцев), 6 культур - из неизмененной кожи больных с острой ожоговой травмой, 5 - из рубцовоизмененной кожи, 5 - из кожи псориатических очагов. Состояние культуры контролировали с помощью инвертированного микроскопа и компьютерной программы слежения за ростом культуры. Фиксировали изменения культуры в процессе роста каждые 24 часа в течение 5 суток и в те же сроки определяли изменения уровня фибронектина и цитокинов (ИЛ-6 и ФНО-α) в культуральной среде с помощью ИФА.

Культуры получали по стандартной технологии в условиях абсолютной влажности, 37°С, 5% СO₂. Для исследования использовали культуры 4-6 пассажа с исходной концент-рацией 20 тысяч клеток на 1 см².

Визуальное наблюдение не позволило выявить отчетливых различий культур различного генеза. Все культуры формировали монослой в равные сроки. Картина монослоя была характерной для фибробластов с типичным рисунком. Клетки были преимущественно веретеновидной формы, с четкими контурами, выраженными отростками, плотными ядрами. Характер синтеза одного из основных белков межуточного вещества - фибронектина у клеток неизмененной кожи различного происхождения оказался различен. Учитывая клинические данные, различную локализацию места забора биоптатов, возможные возрастные различия доноров, в качестве контрольных данных были отобраны результаты, полученные на штаммах культур, выделенных из кожи здоровых добровольцев. Именно с этими результатами проводилось сравнение данных, полученных на штаммах культур патологически измененной кожи. У штаммов фибробластов, полученных из рубцово-измененной кожи, уровень фибронектина через 24 часа после пересева был достоверно ниже, чем у фибробластов здоровой кожи, в последующие дни он интенсивно нарастал и к четвертым суткам отчетливо превышал таковой в клетках культур контрольных штаммов. В культурах клеток кожи псориатических очагов синтез фибронектина был значительно ниже, чем в культурах клеток, полученных из биоптатов неизмененной кожи здоровых добровольцев, и несколько ниже, чем в культурах клеток рубцово-измененной кожи.

Процесс накопления этого белка в культурах штаммов псориатических очагов в течение первых четырех суток после пересева хотя и шел интенсивнее, но не достигал уровня, зафиксированного в культурах клеток неизмененной кожи. Определяли уровень спонтанного и стимулированного ИЛ-6 и ФНО-α в культурах дермальных фибробластов различного происхождения и накопление этих полипептидов в культуральной среде в процессе роста культуры. Характер накопления ИЛ-6 фибробластами, выделенными из здоровой кожи, значительно отличался от такового у клеток, выделенных из рубцово-измененной кожи. Отчетливые различия выявлены и в уровнях спонтанного и стимулированного образования этого полипептида клетками различного происхождения. Достоверных отличий изменения уровня ФНО-α в процессе роста культур не выявлено.

Таким образом, при отсутствии отчетливых объективных отличий при микроскопии культур фибробластов, полученных из разных источников, функционально эти клетки отличаются друг от друга. Изучение синтеза различных полипептидов, цитокинов, факторов роста на этапах роста культуры представляет интерес для последующих исследований и понимания процессов.


Алейник Д.Я., Чарыкова И.Н., Сидорова Т.И.
ФГУ «Нижегородский НИИ травматологии и ортопедии Росмедтехнологий», г. Нижний Новгород