Культивирование и предтрансплантационная подготовка мультипотентных меземхимных стромальных клеток

In the Stem Cell Bank Pokrovkyi the method of human bone marrow mesenchimal stem cell isolation and pretransplantation preparation was developed and adapted for clinical use. In the Stem Cell Bank Pokrovkyi patients suffering from lateral amyotrophic sclerosis and patients with severe spinal cord trauma were treated with mesenchimal stem cells isolated from their own bone marrow and cultivated in the laboratory conditions. After transplantation an improvement in their state was observed. Currently monitoring of their state is going on.


Красный костный мозг является богатым источником гемопоэтических и мезенхимных стромальных клеток, поэтому выделение и трансплантация стволовых клеток красного костного мозга считается перспективным способом лечения ряда заболеваний.

В Покровском банке стволовых клеток была разработана и адаптирована для клинического применения методика выделения и подготовки к трансплантации мультипотентных мезенхимных стромальных клеток человека (ММСК). В Покровском банке стволовых клеток была произведена подготовка трансплантата для лечения пациентов с боковым амиотрофическим склерозом и с тяжелыми травмами спинного мозга. После выделения и культивирования пациентам проводили трансплантацию аутогенных мультипотентных меземхимных стромальных клеток красного костного мозга (ККМ). Выделение фракции аутоММСК из аспирата ККМ проводили с помощью аппарата Sepax (Biosafe, США) или в градиенте Ficoll-Paque Plus (Stemcell Technologies, Канада), после чего переносили клетки в пластиковые флаконы и культивировали их на среде α-МЕМ с добавлением 20% FBS, глютамина и антибиотиков (пенициллина и стрептомицина). На 4 пассаже переводили культуру клеток на синтетический заменитель сыворотки. Перед трансплантацией клетки тщательно отмывали раствором Hank's, ресуспендировали в альбумине и переносили в гемакон.

После выделения аутогенных мультипотентных меземхимных стромальных клеток человека и перед выдачей пациенту проводили иммунофенотипирование мультипотентных меземхимных стромальных клеток с помощью проточного цитофлуориметра Cytomics FC500 (Becman Coulter, США). ММСК окрашивали антителами к поверхностным антигенам CD34, CD90 и CD105. Также на последнем пассаже проводили анализ кариотипа культуры ММСК и бактериологическое исследование культуральной среды. По результатам анализов бактериальной или грибковой контаминации ни в одном из образцов обнаружено не было, клетки имели нормальный кариотип, содержание CD 105⁺ составило 99,02±0,04%, содержание CD90⁺ - 98,04±0,15%, количество CD34⁺ (гемопоэтических стволовых клеток) составило <0,5%.

После лечения наблюдалось улучшение состояния пациентов. В настоящий момент продолжается мониторинг состояния пациентов профильными клиниками.


Смолянинов А.Б., Новицкий А.В., Логачев А.А., Хрупина А.С.
Военно-медицинская академия, Покровский Банк Стволовых Клеток, Санкт-Петербург