Сегодня: 11.01.2018
PDA | XML | RSS
 
 





Реклама от Google

Влияние фактора времени на биологические свойства криоконсервированных клеток пуповинной крови

We have studied the biological activity of cryopreserved umbilical cord blood cells after thawing and storage for 16 hours at +4eC. We have found that the storage of the material is possible, but during this time functional activity of cryopreserved umbilical cord blood cells (viability, number of viable CD34+ cells and CFU-GM) decreased by about 30%.


Во всем мире пуповинная кровь (ПК) признана источником гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), эффективность трансплантации которых показана во многих исследованиях. Поэтому растет число людей, которые хранят ПК своих детей в качестве их биологической страховки. Банк клеток пуповинной крови «Гемабанк» (Москва) в своей работе по персональному хранению ПК адаптировал методику, первоначально разработанную в РОНЦ им. Н.Н.Блохина для криоконсервирования ГСК костного мозга. Методика трансплантации гемопоэтических стволовых клеток, как правило, не предполагает отмывку биоматериала от криопротектора. Если дополнительные манипуляции с концентратом гемопоэтических стволовых клеток после разморозки (отмывка от криопротектора и хранение в течение нескольких часов) не ведут к потерям функциональной активности гемопоэтических стволовых клеток, то, возможно, уместно перед трансплантацией освобождать концентрат ГСК от криопротектора, особенно если предстоит транспортировка в размороженном состоянии.

Цель проведенного исследования заключалась в подтверждении эффективности применяемой в Гемабанке методики криоконсервации гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови в отношении формальных признаков: жизнеспособности мононуклеарных клеток, колониеобразующей активности и содержания CD34+ клеток после разморозки, а также в проверке возможности сохранения этих свойств после отмывки от криопротектора и хранении в течение 16 часов.

Образцы донорской пуповинной крови (20 образцов) были получены из криохранилища «Гемабанка», забор, транспортировка, процессинг и хранение которых производилось согласно принятому протоколу. Образцы размораживали на водяной бане при +37еС до исчезновения кристаллов льда, затем центрифугировали на 2000 об/мин в течение 7 мин при +18еС, отсасывали бесклеточный надосадок, осадок с клетками ресуспендировали в декстране («Полиглюкин»). Хранение ресуспендированных клеток осуществляли при температуре +4еС в течение 16 часов. Подсчет жизнеспособных мононуклеарных клеток ПК проводился в камере Горяева (краситель анексин). Определение функциональной активности ГСК осуществляли по способности формирования колоний в полужидкой культуральной среде. Подсчет жизнеспособных CD34+ клеток проводился методом проточной цитофлуориметрии.

Количество ядросодержащих клеток ПК после размораживания и отмывки уменьшался на 7±0.6%, а после хранения в течение 16 часов при +4еС - на 8.5±0.7% относительно исходного количества клеток перед криоконсервацией. Процент жизнеспособных клеток непосредственно после разморозки составил 88±8%, спустя 16 часов при +4еС - 75±9%. Количество CD34+ клеток после разморозки составило соответственно 0,53Ч106±0,23 с жизнеспособностью 88±7% и 0,31Ч106±0,2 и 96±6%. Образцы сразу после отмывания содержали 64,5±11,2 КОЕ-ГМ, а после хранения в течение 16 часов при +4еС - 34,5 КОЕ-ГМ.

Вывод.

На основании формальных признаков (жизнеспособность, количество CD34+ клеток и КОЕ-ГМ) методика Гемабанка сохранения и разморозки гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови эффективна. Транспортировка или хранение размороженного материала возможна в течение 16 часов при +4еС, однако за этот промежуток времени происходит снижение формальных показателей функционального состояния криоконсервированных клеток пуповинной крови примерно на треть.


1Мхеидзе Д.М., 2Потапов И.В., 2Люндуп А.В.
1РОНЦ им. Н.Н. Блохина, 2ОАО «Институт стволовых клеток человека», Москва


Комментировать:
Имя:

Сообщение:


Похожие статьи:

Сравнительная оценка результатов алло- и аутопластики пострезекционных дефектов у детей

Категории: Другое, Трансплантаты и биоматериалы,
This paper shows a comparative assessment of bone plasticing held in the childrens hospital of the city of Voronezh in 5 years. As a result of research, we believe that the use of demineralized bone..

Клиническая эффективность комбинированного биотрансплантата

Категории: Трансплантаты и биоматериалы,
Клиническая эффективность комбинированного биотрансплантата на основе структурированного коллагенового материала при лечении ложных суставов костей конечностей Combined biological graft was applied in..

Экспериментальная оценка остеоиндуктивности рекомбинантного костного морфогенетического белка

Категории: Клеточные технологии, Тканевая инженерия,
Вестник травматологии и ортопедии им. Н.Н. Приорова №4 2010 Миронов С.П., Гинцбург А.Л., Еськин Н.А., Лунин В.Г., Гаврюшенко Н.С., Карягина А.С., Зайцев В.В. Экспериментальная оценка остеоиндуктивности..

Клеточные технологии в лечении дегенеративно-дистрофических заболеваний костей и суставов

Категории: Клеточные технологии,
Несмотря на полиэтиологичность дегенеративно-дистрофических заболеваний костей и суставов, их патогенез почти при всех поражениях имеет васкулярную природу. В основе известных хирургических методов..