The aim of research was to investigate allogenic fetal liver cell (FLC) transplantation in animals with liver failure model that was induced by administration of 2-acetylamino-fluorene (hepatocyte proliferation inhibitor) and subsequent partial hepatectomy. This model provides perfect conditions for manifestation of FLC potential under state when normal liver recovery is blocked.
It was shown the positive effect of FLC transplantation that has two phases: within the 1st week after transplantation and long term effects - after the 3d week.
Целью исследования явилось изучение эффектов трансплантации аллогенных клеток фетальной печени (КФП) животным с моделью поражения печени, индуцированного введением ингибитора пролиферации гепатоцитов 2-ацетила-минофлуорена (ААФ) и последующей частичной гепатэктомией (ЧГЭ). Эта модель должна создать идеальные условия для раскрытия потенциала КФП в условиях, когда восстановление печени реципиента за счет пролиферации собственных гепатоцитов заблокировано.
Материалы и методы.
Модель формировалась на крысах-самцах путем интрагастрального введения ААФ (30 мг ААФ/кг массы тела) на протяжении 5 суток, после чего проводилась ЧГЭ. Было сформировано 4 группы животных: 1) одновозрастной интакт; 2) контроль: животные с моделью ААФ/ЧГЭ, которым в селезенку вводили среду замораживания; 3) экспериментальная группа: животные с моделью ААФ/ЧГЭ, которым трансплантировали в селезенку по 10 млн КФП. Введение клеточной суспензии или среды консервирования проводилось одновременно с проведением ЧГЭ, объем вводимой суспензии составлял 0,3 мл. Срок наблюдения за животными составил 21 сутки. В этот период в сыворотке крови измеряли: содержание альбумина и общего билирубина, а также активность маркерных ферментов повреждения печени: аланин- (АЛТ) и аспартатаминотрансфераз (ACT), лактатдегидрогеназы (ЛДГ).
Смертность животных в экспериментальной группе на 21 день после трансплантации составила 40% против 52% в контрольной группе. Уровень альбумина резко снижался после проведения ЧГЭ в обеих группах с минимумом на 7 сутки, когда он составлял 14,59±0,9 г/л в контрольной группе (против 43,98±1,1 г/л в интакте) и 16,57±0,8 г/л в экспериментальной. Далее показатель медленно повышался; достоверные отличия между контрольной и экспериментальной группами наблюдались на 21 сутки, когда уровень данного показателя составлял 21,73±2,9 и 32,16±0,8 г/л, соответственно.
Схожая динамика наблюдалась в содержании общего билирубина. Достоверные отличия между контрольной и экспериментальной группами наблюдались на пике повышения параметра на 7 сутки (58,04±6,1 и 35,16±5,0 мкмоль/л, соответственно, против 2,51±0,3 мкмоль/л в интакте), а также на 21 сутки (3,49±0,1 и 1,55±0,4 мкмоль/л). Активность ЛДГ повышалась в обеих группах с моделью ААФ/ЧГЭ только на 3 сутки, отмечая наиболее острую фазу поражения печени. Пик повышения активности ACT также приходился на 3 сутки после ЧГЭ и трансплантации, однако показатель оставался повышенным до конца периода наблюдения. Достоверные отличия между контрольной и экспериментальной группами наблюдались на 7 сутки (253,10±16,1 и 211,90±9,6 Ед/л, соответственно, против 120,10±2,9 Ед/л в интакте), а также на 21 сутки (224,90±7,3 и 179,60±10,2 Ед/л). Схожая динамика наблюдалась и в активности АЛТ, однако достоверных отличий между экспериментальной и контрольной группами обнаружено не было на протяжении всего периода наблюдения.
Проведенные исследования позволили выявить позитивное действие трансплантации КФП, которое носило двухфазный характер: в пределах первой недели после трансплантации и в более отдаленные сроки.
Работа выполнена при поддержке гранта Украинского Научно-Технического Центра (проект № 4419).
Лебединский А.С., Грицай Д.В., Оченашко О.В., Кришталь А.В., Сукач А.Н., Петренко А.Ю.
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков, Украина