Технологии выделения, культивирования и криоконсерации мононуклеаров пуповинной крови

The cord blood and bone marrow mononuclears cultures were analyzed. Mononuclears chromatine DNA and cells chromatine DNP structure were studied, histons and nonhistones proteins were evaluated by step deproteinesation. Cell circle and CD34⁺, CD45⁺ receptors expression, aneuplodia and aberrations level, apoptosis rate were analyzed. Were received prepatents for methods of cord blood mononuclears allocation and their viability estimation. Also elaborated the method of experimental fetal hypoxia treatment by mononuclears injection, and the method of experimental hepatic insufficiency treatment. The decreasing of AO binding and tritii labeled actinomicinum D in mononuclears, and also the correlation between AO binding and rivanol SO₂ indexes from DNA cells chromatin were detected. Were revealed the definite patterns in mononuclears interphase chromatine structural organization. During cultivation increased the MNK in later stages of cell circle and proliferation index magnified. In bone marrow mononuclears cells culture expression of CD34⁺, CD45⁺ receptors changes, chromatin destabilization occurs. The influence of cryoprotection agents combination on the aberrations level during MNK cultivation noticed. The different methods of cryoconcervation influence on structural and functional propeties of mononuclears DNA chromatin, level of their viability and changes of apoptosis rate were distinguished. The optimal conditions for cryoconservation and caryotyping safety parameters, aneuploidia and aberrations levels evaluation were elaborated. The scientific practical recommendations of cells materials certification are developed, as the necessary element of cells therapy standardization and safety providing.


Анализировали культуры мононуклеаров пуповинной крови и костного мозга. Изучали ДНК хроматина мононуклеаров и структуру ДНП хроматина клеток, оценивали гистоны и негистоновые белки, используя ступенчатую депротеинизацию. Анализировали клеточный цикл и экспрессию рецепторов СД 34+, СД 45+, уровень анеуплоидии и аберраций, показатели апоптоза. На способ выделения мононуклеаров из пуповинной крови и способ оценки их жизнеспособности, получены предпатенты (2007-/0576.-/0577.1). Разработан способ лечения гипоксии плода в эксперименте, путем введения мононуклеаров (2006/0979.1), а также способ лечения печеночной недостаточности в эксперименте (2006/0998). В мононуклеарах выявлено уменьшение связывания АО и меченого тритием актиномицина Д, а также корреляция показателей связывания АО и риванола SO₂ с ДНК хроматина клеток. Выявлены определенные закономерности структурной организации интерфазного хроматина мононуклеаров.

При культивировании происходит увеличение МНК находящихся на более поздних стадиях клеточного цикла и возрастание пролиферативного индекса. В культуре мононуклеарных клеток из костного мозга экспрессия рецепторов СД 34+, СД 45+ изменяется, происходит дестабилизация хроматина. Отмечено влияние сочетания криопротекторных средств на уровень аберраций при культивировании МНК. Выявлено влияние разных способов криоконсервации на структурно-функциональные свойства хроматина ДНК мононуклеаров, уровень их жизнеспособности и изменения показателей апоптоза. Разработаны оптимальные условия криоконсервации и параметры безопасности по кариотипированию, оценки уровня анеуплоидии и аберраций. Разрабатываются научно практические рекомендации паспортизации клеточных материалов, как необходимого элемента обеспечения их стандартности и безопасности для целей клеточной терапии.


Толмачев B.C., Боровицкая Е.И., Кудрина Н.О., Смагулова Г.К.
РГП Научный Центр акушерства, гинекологии и перинатологии МЗ РК, г. Алматы, Казахстан