Применение мембранного биоматериала для защиты аллотрансплантата от иммунной реакции реципиента

With histological and immunohistochemical methods there was proved a possibility for the use of allogenic biomaterials to prevention of recipient immune reaction against allotransplant.

Цель исследования.

Изучить возможность защиты клеток аллотрансплантата от иммунной реакции реципиента с помощью барьера из аллогенного мембранного биоматериала.

Материалы и методы.

Под кетаминовым наркозом 24 кроликам была произведена ортотопическая трансплантация аллогенного хорио-ретино-витреального комплекса глаза в оболочке из мембранного биоматериала, полученного путем специальной обработки висцеральной фасции. В контрольной группе (12 кроликов) аналогичный комплекс пересаживали без биоматериала.

Для исследования глаза энуклеировали на 14, 30, 60, 90, 120, 180 и 270 сутки после операции. Гистологические срезы глазного яблока окрашивали гематоксилином-эозином, а также по методам Ван Гизона, Маллори и Ниссля. Иммуногистохимическое исследование проводили с помощью непрямого иммунопероксидазного метода с использованием моноклональных антител (Santa Cruz Biotechnology Inc.) к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA) и трансформирующему фактору роста (TGF-β1). Также проводили электронномикроскопическое исследование.

Результаты.

В контрольной группе уже на 14 сутки после трансплантации у животных развивалась иммунная реакция, выражающаяся в макрофагальной, а затем лимфоцитарной инфильтрации пересаженного комплекса с последующим некрозом нейронов сетчатки. На 30 сутки обнаруживался тотальный фиброз пересаженного комплекса с высокой экспрессией TGF-β1. Отдельные клетки сохранившегося пигментного эпителия пересаженной сетчатки были замурованы между новообразованными коллагеновыми волокнами. У животных опытной группы иммунная реакция не развивалась, ограничиваясь макрофагальной инфильтрацией мембранного биоматериала, окружающего пересаженный хорио-ретино-витреальный комплекс. Архитектоника нейронов сетчатки в пересаженном комплексе была неизмененной в течение 120 суток, а ультраструктура нейронов и клеток пигментного эпителия сохранялась до 180 дней с момента пересадки. Во все наблюдаемые сроки обнаруживалась низкая экспрессия TGF-β1. В дальнейшем большинство нейронов сетчатки погибали, но через 270 дней выявлялись группы атипично расположенных нейронов, которые окрашивались по Нисслю и экспрессировали PCNA-антиген, т.е. обладали пролиферативной активностью. Оболочка из аллогенного биоматериала подвергалась постепенной деградации и замещалась васкуляризованной рыхлой соединительной тканью. В промежутках между биоматериалом и склерой реципиента развивалась сосудистая сеть.

Заключение.

Применение мембранного биоматериала как барьера позволяет достичь длительного выживания клеток сетчатки при трансплантации хорио-ретино-витреального комплекса глаза. По-видимому, иммунная реакция реципиента ограничивается макрофагальной инфильтрацией, приводящей к деградации биоматериала и его резорбции, поэтому биоматериал можно рассматривать как протектор. Обнаруженные в конечные сроки эксперимента нейроны с атипичным расположением, возможно, появляются в результате выживания и пролиферации нейральных стволовых клеток.


Мулдашев Э.Р., Муслимов С.А., Мусина Л.А., Мусин У.К., Волгарева Е.А.
ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Министерства здравоохранения и социального развития РФ», г. Уфа