Оценка жизнеспособности ядросодержащих клеток пуповинной крови в банке пуповинной крови Харькова

The importance of choice adequate method of cell viability evaluation was demonstrated.


Пуповинная кровь (ПК) признана полноценным источником гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Это привело к необходимости создания банков КК, в которых образцы хранятся в жидком азоте без потери их биологических свойств.

В связи с необходимостью создания банков, разработка эффективных методов замораживания является актуальной задачей. Эффективность метода определяется использованием адекватных методов оценки качества размороженного материала.

В нашем банке определение ядросодержащих клеток пуповинной крови, в том числе и ГСК проводится самым современным на данный момент методом проточной цитофлуориметрии с использованием реагентов Becton Dickinson по ISHAGE протоколу. Жизнеспособность (ЖС) клеток оценивается с использованием ДНК красителя 7AAD.

Следует отметить, что используемый многими учеными метод световой микроскопии в оценке ЖС клеток (по включению в клетки трипанового синего) не является адекватным, поскольку оценка ЖС ГСК методом световой микроскопии невозможна в силу их морфологического сходства с популяцией CD45⁺ клеток и их малочисленности, а так же отсутствие окрашивания клеток трипановым синим не свидетельствует об истинной ЖС клеток, а лишь отражает проницаемость мембран для этого красителя, которая снижается при использовании высокомолекулярных соединений, создающих защитный «каркас» вокруг клетки.


Бабийчук Л.А., Зубов П.М., Кудокоцева О.В., Зубова О.Л., Рязанцев В.В.
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков, Украина