Оценка анализа на колониеобразующие единицы при характеристике образца пуповинной крови

Human cord blood provides a convenient alternative to bone marrow as a rich source of hematopoietic progenitor cells. CFC-assay was performed for mononuclear fraction of cord blood samples. CFC-assay was conducted by typing adult blood cells, which were recognized in formed colonies after 14 days of culturing in full methylcellulose medium Methocult (Stem Cell Technologies). It was revealed, that 99,2 % of samples analyzed contain CFU able to give rise to all lineage of blood. It was concluded, that there is enough amount of functionally active hematopoietic progenitor cells in cord blood samples, stored in Pokrovskiy Stem Cells Bank.


Пуповинная кровь является богатым и перспективным для клинического применения источником гемопоэтических стволовых клеток. Пуповинная кровь наравне с костным мозгом применяется для трансплантации при лечении онкогематологических заболеваний. Однако для достижения терапевтического эффекта необходимо, чтобы образец пуповинной крови содержал достаточное количество функционально активных гемопоэтических стволовых клеток, которые могут развиваться как в лимфоидном, так и в эритроидном и миелоидном направлениях - колониеобразующих единиц.

Содержание колониеобразующих единиц оценивалось в мононуклеарной фракции из образцов пуповинной крови, собранных во время родов до рождения плаценты. Мононуклеарная фракция выделялась автоматическим способом на клеточном сепараторе Sepax S-100 (Biosafe, Швейцария). Анализ на содержание колониеобразующих единиц проводился путем типирования зрелых клеток крови, имеющихся в образовавшихся колониях через 14 суток культивирования в полной 1% метиллцеллюлозной среде MethoCult (Stem Cell Technologies), содержащей 30% фетальной бычьей сыворотки, 1% альбумина коровьей сыворотки, 3 U/mL эритропоэтина, 10-4 М 2-меркаптоэтанола, 2 тМ L-глутамина, и следующие цитокины: фактор стволовых клеток, GM-CSF, IL-3, IL-6 и G-CSF. Исходное количество клеток составляло 0,5-2x10⁴ в каждой чашке Петри. Каждый анализ был продублирован.

Было выявлено, что 99,2% проанализированных образцов содержат колониеобразующие единицы, способные давать клетки крови всех линий дифференцировки. Среди образовавшихся колоний, в среднем, 28% составили BFU-E, 1%-CFU-E, 15%-CFU-M, 4%-CFU-G, 38%-CFU-GM и 14%-CFU-GEMM. Общее среднее количество образовавших колоний составило 162,4±9,5 (р<0,001), что свидетельствует о наличии в достаточном количестве функционально активных гемопоэтических стволовых клеток в образцах пуповинной крови, хранящихся в «Покровском банке стволовых клеток».

Таким образом, все образцы пуповинной крови, заложенные на хранение в ПБСК, соответствуют международным требованиям.


Хрупина А., Логачев А., Иволгин Д.А., Смолянинов А.Б.
Покровский Банк Стволовых Клеток, Санкт-Петербург