Клеточный носитель аутогенных эпителиальных прогениторов роговицы человека

The purpose of the study is to develop a method of obtaining corneal graft using surface of soft contact lenses as the substrate for the cultivation of autologous cells.

It was shown that the Pure Vision ® (Balafilcon A) and Biofinity ® (Comfilcon A) lenses are promising carriers for the cultivation of autologous cells.


Восстановление прозрачности роговицы составляет важную проблему современной офтальмологии, решение которой требует разработки новых методологических подходов.

Цель исследования.

Получение биотрансплантанта эпителиальных прогениторов роговицы человека на поверхности мягкой контактной линзы.

По протоколу, одобренному этическим комитетом ГОУ ВПО УГМА Росздрава, от трех пациентов, оперированных по поводу катаракты, после заполнения испытуемыми добровольного информированного согласия, получали биоптаты роговицы из области лимба. В течение 4-х недель культивирования (среда DMEM с 10% эмбриональной телячьей сыворотки) получали стабильную культуру клеток роговицы человека. На момент нанесения на линзу, культура содержала кератоциты (85%) и эпителиальные прогениторы (15%).

Для исследования были отобраны 3 вида линз с отсутствием кислород-опосредованного влияния на дыхание культивируемых клеток: Biofinity® (Comfilcon A), Pure Vision® (Balafilcon А) и Acuvue® Oasys (Senofilcon А). В исследовании использовали по 2 линзы каждого вида. Суспензию клеток в количестве 2x10⁵ наслаивали на роговичную поверхность контактных линз, и далее культивировали в течение 10 суток.

При исследовании витальных препаратов оказалось, что на всех исследуемых линзах первичный слой формируют фибробластоподобные кератоциты, с наибольшей эффективностью клонирования на линзах Biofinity® и Pure Vision®. В первом случае образовывались упорядоченные колонии, из которых к восьмым суткам формировался монослой кератоцитов. При этом наблюдалась хаотичная адгезия кератоцитов с быстрым формированием монослоя на роговичной поверхности линзы. В отличие от кератоцитов эпителиальные прогениторные клетки ни в одном случае не образовывали на поверхности линз первичные колонии. Наиболее активно вторичное колониеобразование наблюдалось на монослое кератоцитов на поверхности линз Pure Vision®: сначала в виде адгезии единичных эпителиоцитов, а к восьмым суткам - с признаками колониального роста.

На линзах Acuvue® Oasys к восьмым суткам была отмечена только фиксация отдельных клеток с остановкой дальнейшего роста.

Вывод.

Линзы Pure Vision® (Balafilcon А) и Biofinity® (Comfilcon А) являются перспективными клеточными носителями аутогенных эпителиальных прогенеторов роговицы человека.


Макеев О.Г., Коротких С.А., Князева Е.С., Герасимов М.Ю., Зверева А.Е.
ГОУ ВПО «Уральская Государственная Медицинская Академия Росздрава», ГУЗ СО «Институт медицинских клеточных технологий», г. Екатеринбург