Исследование эффективности применения аутогенных смешанных клеточных культур дермальных фибробластов

The aim of the study was the development of technology of treatment of neurotrophic ulcers in diabetic patients using autologous cultivated cells.

It was shown, that drawing on a surface of neurotrophic ulcers of cultured dermal fibroblasts, enriched in mesenchymal stem cells, accompanied by acceleration of epithelization of wound surface compared with the use of unenriched monocultures.

The clinical trials suggest the establishment of a basis for the development of safe and effective technique for cell therapy of ulcerative lesions of the lower extremities in type II diabetic patients.


Среди осложнений сахарного диабета (СД) основной причиной инвалидизации больных в настоящее время являются нейротрофические язвы нижних конечностей, возникающие у 15% пациентов, из которых до 24% подвергаются ампутации. Ежегодно возрастающее число больных СД и низкая эффективность терапии язвенных поражений ставят проблему их заживления в разряд требующих скорейшего решения.

Целью исследования явилась разработка технологии лечения нейротрофических язв у больных СД с использованием аутогенных культивированных клеток.

Исследование выполнялось согласно протоколу, одобренного локальным этическим комитетом ГКБ № 40 г. Екатеринбурга. Испытание технологии проведено у 10 пациентов с СД II типа тяжелой степени. Средний возраст пациентов составил 65,2 лет. Стаж СД - 8,2 лет. У всех пациентов имелись обширные язвенные дефекты на стопе или голени без признаков регрессии в течение 6 и более месяцев.

Забор эксплантата выполняли с ягодичной области, независимо от стадии раневого процесса. Культивирование клеток проводили по оригинальной методике (Патент РФ № 23457811). У трех испытуемых из эксплантированной вместе с дермой подкожно-жировой ткани были выделены мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК), которые использовали для обогащения линий дермальных фибробластов в аутогенном варианте. Для фиксации клеток на поверхности язвы применяли специальную аутогенную биодеградируемую подложку.

После однократного нанесения аутофибробластов, сокращение язвенной поверхности более чем на 50% наблюдалось у половины пациентов к концу первой недели наблюдения. У пациентов с трансплантацией культур, обогащенных ММСК, через семь дней зафиксировано уменьшение площади язвы на 70%. Окончательное заживление язв у этих пациентов наблюдалось в течение 3-6 недель. У остальных пациентов с трансплантацией монокультур фибробластов, окончательная эпителизация отмечалась в период от 11 до 21 недели. Полная эпителизация язвенного дефекта у одной испытуемой не была достигнута в связи с нарушением рекомендованной методики (использование для закрытия раневой поверхности сорбирующей марлевой повязки).

Средняя продолжительность заживления (с момента трансплантации аутофибробластов до эпителизации раны) при локализации язвы на стопе составила 9,5 недель, при локализации на голени - 19,3 недели. При этом средние сроки полного закрытия ран при использовании обогащенных ММСК культур, составили 4,5±1,5 недели.

Выводы.

1. Нанесение на поверхность нейротрофических язв культивированных дермальных фибробластов, обогащенных ММСК, сопровождается ускорением эпителизации раневой поверхности по сравнению с использованием необогащенных монокультур.
2. Проведенные клинические испытания свидетельствуют о создании основы для разработки безопасной и эффективной технологии клеточной терапии язвенных поражений нижних конечностей при СД II типа.

Макеев О.Г., Зверева А.Е., Васильева М.С., Улыбин А.И., Зубанов П.С., Каракина Ю.В., Васьков В.Н.
ГОУ ВПО Уральская Государственная Медицинская Академия Росздрава, ГУЗ СО «Институт медицинских клеточных технологий», ГКБ № 40, г. Екатеринбург